Sylvie Le Guyader 博士
活细胞成像设施经理, 斯德哥尔摩卡罗林斯卡研究所
Gabriela Imreh 博士
显微镜工程师, 斯德哥尔摩卡罗林斯卡研究所
请介绍一下您在显微镜领域的经验，以及您在卡罗林斯卡研究所活细胞成像设施中的角色。
Sylvie Le Guyader
“我拥有生物学背景，获得了博士学位，并在不同研究所从事博士后工作，积累了丰富的显微镜使用经验。我还积累了帮助人们选购显微镜设备的经验，这促使我创建了卡罗林斯卡研究所的活细胞成像设施。我担任LCI设施经理已有13年。”
Gabriela Imreh
“在LCI设施中，我负责培训人们使用我们拥有的不同显微镜设备。在我们的设施中，我们提供非常全面的培训，以确保用户能够完全自主地为自己的样本进行图像采集和图像分析。培训后，如果他们需要帮助或专家建议，我们也随时在场。对我们来说，关键是用户充分理解他们在做什么，这样他们就能选择最适合其科学问题的物镜和设置。在培训期间，他们有机会测试不同的设置，以便充分理解成像结果。
“我们的目标是让用户成为独立的显微镜学家，能够根据他们的样本和科学问题选择正确的显微镜设置。”
在设施中，您有机会接触多种类型的显微镜设备。根据您的经验，CrestOptics X-Light V3 的主要优势是什么？
我们购买了CrestOptics X-Light V3 转盘共聚焦大约一年前，我们对此有了丰富的经验。在购买之前，我们已经使用过其他转盘共聚焦系统，但在视场、速度和分辨率方面存在一些局限性。因此，我们需要一台升级版的转盘共聚焦。CrestOptics X-Light V3 是一个很好的升级，得益于其大视场以及它专为两台相机而设计。我们选择配备 Prime BSI 相机和 95B 相机（Photometrics），具有不同的像素尺寸，以满足不同放大倍数物镜的奈奎斯特采样率。
“设施用户对 CrestOptics X-Light V3 转盘共聚焦非常满意。”
用户欣赏的另一个相关特性是可以轻松从宽场切换到转盘共聚焦照明模式。用户接受培训，以最大速度和最小照明在宽场模式下获取样本的平铺图像。然后他们使用平铺图像在样本中导航，并决定要去哪里，而不会进一步漂白样本。然后他们可以移动到感兴趣的区域，并切换到转盘共聚焦模式以获取共聚焦图像。
“设施用户非常欣赏从宽场到转盘共聚焦模式的轻松切换，这使他们能够根据应用和实验需求选择合适的成像方式。”
能否请您详细描述一下配备 CrestOptics X-Light V3 的显微镜设置，以及主要用于哪些应用？
我们的系统由一台 Nikon Ti2 组成，一个端口配备 X-Light V3 转盘共聚焦，另一个端口配备单点共聚焦。这使我们能够结合不同的成像模式。最近，我们为系统升级了 CO2 和温度控制的培养箱，以实现活样本成像。
关于生物学应用，我们在 CrestOptics 转盘共聚焦上成像多种样本。最常见的是染有不同蛋白标记物的单层细胞、不同来源和厚度的组织切片以及类器官。
目前，我们正在努力实现FRAP（光漂白后荧光恢复），通过单点共聚焦进行漂白，然后在转盘共聚焦端进行快速成像。FRAP 方法广泛用于研究活细胞中的蛋白质运动性，通过强激光光漂白细胞的特定区域，换句话说，从该区域去除荧光，从而快速监测整个样本中的荧光扩散，直到漂白区域中非荧光探针被替换
“我们培训使用 X-Light V3 的用户是那些需要快速成像和大视场但仍需要光学切片的用户。”
